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BCA蛋白浓度测定试剂盒

货号

名称

规格

目录价

M1003

BCA蛋白浓度试剂盒

500T

299


产品简介:

本公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂 盒是根据目前广泛应用的蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成。其操作简单,灵敏度高,所形成的颜色复合物稳定性佳,受干扰物质影响小。可检测浓度下限达25μg/ml的蛋白样品,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl。 本产品主要成分为:BCA二钠盐,无水碳酸钠,酒石酸钾钠,氢氧化钠,碳酸氢钠和硫酸铜。


组份:

产品货号

产品名称

包装

贮存方式

M1003-1

BCA试剂A

100 ml

RT

M1003-2

BCA试剂B

3 ml

RT

M1003-3

牛血清白蛋白(BSA)标准溶液(5 mg/ml

25mg

   -20

M1003-3

PBS溶液

10 ml

RT


保存条件:

整套试剂常温保存,保质期一年。蛋白标准品溶解后应放-20℃保存。span>


操作说明:

1、取1ml蛋白标准配置液加入到25mgBSA的蛋白标准管中,完全溶解蛋白标准品,即为25mg/ml的蛋白标准溶液。配制成的蛋白标准溶液可-20℃长期保存。

2、取适量25mg/ml蛋白标准溶液,稀释至终浓度为0.5mg/ml。标准品最好与蛋白样品用同样的溶液稀释。但为了简便起见,通常使用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。

3、做标准曲线。将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板中,不足20μl的加标准品稀释液补足到20μl。

4、将待测的蛋白样品稀释至合适浓度,加到96孔板中,使待测样品总体积也为20μl。

5、每孔加入考马斯亮蓝G250溶液200μl,充分混匀(可将酶标板放在振荡器上振荡30s),室温放置3-5min后,以标准曲线0号做参比,在 595nm波长下比色测定,记录各孔吸光度值。以标准品蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg),除以样品稀释液总体积(20μl),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度。

6、如用分光光度计测定,请在第三步的时候将标准品体积改为1ml,浓度梯度用生理盐水稀释为0,1,2,5,10,15,30μg/ml。或根据样品调整浓度梯度。

7、将样品稀释至合适浓度,加到小试管中,使待测样品总体积也为1ml。

8、每只试管加考马斯亮蓝G250溶液3ml,充分混匀,室温放置3-5min后,以标准曲线0号做参比,在 595nm波长下比色测定,记录各孔吸光度值。


注意事项:

1.BCA法测定蛋白浓度受温度和时间的影响较大,吸光度值会随着时间的延长不断升高,且显色反应会因温度的升高而加快。如果不能精确控制显色反应的时间和温度,建议每次测定都需要做标准曲线。

2.本试剂也适用与分光光度计测定,但需要根据测定的最小体积调整样品和BCA工作液的用量。

3.为保证蛋白的精确定量,样品的提取和标准蛋白的配制最好选用相同的缓冲液,同时也要保证两者检测条件的一致性。如果缓冲液本身就有较高的背景值,建议使用其他的方法测定。

4.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20, 60, 80。但在样品含有脂类物质时将明显提高吸光度值。且受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇或β-巯基乙醇低于1mM。不适用BCA法时建议使用其他方法测定。






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